DuRed核酸染料（10,000× 水溶液）使用說明書

點擊下載日期：2014/10/14 8:51:13

DuRed核酸染料（10,000× 水溶液）使用說明書
DuRed核酸染料特點
● 無毒性：DuRed 獨特的油性和大分子量特點使其不能穿透細胞膜進入細胞內，艾姆斯氏試驗結果也表明，該染料的誘變性遠遠小于EB。
● 靈敏度高：適用于各種大小片段的電泳染色，對核酸遷移的影響小于SYBR Green I。
● 穩(wěn)定性高：適用于使用微波或其它加熱方法制備瓊脂糖凝膠；室溫下在酸或堿緩沖液中極其穩(wěn)定，耐光性強。
● 信噪比高：樣品熒光信號強，背景信號低。
● 操作簡單：與 EB 一樣，在預制膠和電泳過程中染料不降解；而電泳后染色過程也只需30 分鐘且無需脫色或沖洗，即可直接用紫外凝膠透射儀觀察。
● 適用范圍廣：可選擇電泳前染色（膠染法）或電泳后染色（泡染法）；適用于瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠電泳；可用于 dsDNA、ssDNA 或 RNA 染色。
● 與EB有相同的光譜特性，無需改變?yōu)V光片及觀察裝置：標準的 EB 濾光片或 SYBR 濾光片都適用，使用與觀察EB相同的普通紫外凝膠透射儀觀察即可，在 300nm 紫外光附近可得到*佳激發(fā)。但是DuRed不能被488 nm氬離子激光器或相似波長的可見光完全激發(fā)，因此不推薦使用此類激發(fā)裝置的成像系統(tǒng)。對于此類裝置，我們推薦您使用DuGreen（Cat# 011或012），它和SYBR Green I的光譜相似，靈敏度相當，但更加穩(wěn)定。
DuRed使用方法簡介

1．膠染法（用法同EB）（推薦方法）

（1） 制膠時加入DuRed 核酸染料（例如：每50mL 瓊脂糖溶液中加入5μL DuRed 10,000× 儲液，
以此比例類推）。
（2）按照常規(guī)方法進行電泳。
注意事項：
u 此方法染色染料用量相對較少。500 μL染料大約可以做100塊 50mL的膠。
u 由于DuRed具有良好的熱穩(wěn)定性，可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷卻。搖晃，振蕩或者翻轉以保證染料充分混勻。也可以選擇將DuRed儲液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中，然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。DuRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。
u 含有染料的預制凝膠溶液可以大量制備，并長期保存直到使用。
u 此方法不適合預制聚丙烯酰胺凝膠，對于聚丙烯酰胺凝膠請使用泡染法。
2．泡染法
（1） 按照常規(guī)方法進行電泳。
（2）用H2O將DuRed 10,000× 儲液稀釋約3,300倍到0.1M NaCl中，制成3× 染色液。（例如將15μL DuRed 10,000× 儲液和5mL 1M NaCl加到45mL H2O中）。
（3）將凝膠小心地放入合適的容器中，如聚丙烯容器中。緩慢加入足量的3× 染色液浸沒凝膠。室溫振蕩染色30min左右，*佳染色時間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對于含3.5～10％丙烯酰胺的凝膠，染色時間通常介于30min到1h，并隨丙烯酰胺含量增加而延長。
注意事項：
u 用泡染法染色時，染料用量較多。單次使用的染色液可重復使用3次左右。
u 3× DuRed染色液可以大量制備，在室溫下避光保存直至用完。
u 如果總是看到條帶彌散或分離不理想，建議使用泡染法染色以確認問題是否與染料有關。如果染色后問題依舊存在，則說明問題與染料無關，請嘗試：降低瓊脂糖濃度；選用更長的凝膠；延長凝膠時間以保證邊緣清晰；改進上樣技巧或選擇泡染法染色。