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解決方案

微生物的糖發(fā)酵

點(diǎn)擊次數(shù):2652  日期:2014/4/17 9:02:32

一、單糖發(fā)酵試驗(yàn)

(一)、實(shí)驗(yàn)原理

單糖發(fā)酵是將葡萄糖,乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi),使其*終濃度為 0.75~1%。并加入一定量酚紅指示劑及小倒管,制成單糖發(fā)酵管,接種細(xì)菌經(jīng)37℃培養(yǎng)18~24小時,若能分解糖產(chǎn)酸則酚紅指示劑由紅變黃,若能分解 甲酸有CO2和H2等氣體形成,小倒管內(nèi)則聚集有氣泡;不分解,則指示劑不變色。

(二)、實(shí)驗(yàn)材料

1.菌種:大腸桿菌,傷寒桿菌18~24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。

2.培養(yǎng)基:葡萄糖發(fā)酵管,乳糖發(fā)酵管等。

(三)實(shí)驗(yàn)方法

1.將傷寒桿菌,大腸桿菌按照液體接種方法分別接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管內(nèi)。

2.置37℃孵箱培養(yǎng)18~24小時。

3. 觀察結(jié)果:由于一些細(xì)菌能分解某種糖類產(chǎn)酸,所以培養(yǎng)基中PH下降到7.0以下,在酚紅指示劑的顯示下,培養(yǎng)基顏色由紅變黃。產(chǎn)酸者以“+”表示,如果同 時產(chǎn)生氣體,則培養(yǎng)基中小倒管內(nèi)有氣泡出現(xiàn),此乃產(chǎn)酸又產(chǎn)氣,以“⊕”表示,不分解,則指示劑不變色,用“-” 表示。

(四)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

傷寒桿菌 大腸桿菌

葡萄糖 + ⊕

乳 糖 - ⊕

二、V-P(Voges-Proskauer)試驗(yàn)

(一)、實(shí)驗(yàn)原理

有些細(xì)菌如產(chǎn)氣桿菌,分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,丙酮酸脫羧,生成乙酰甲基甲醇,在堿性環(huán)境中被氧化為二乙酰,再與培養(yǎng)基內(nèi)胍基結(jié)合,生成紅色化合物,V—P試驗(yàn)陽性。

(二)、實(shí)驗(yàn)材料

1.菌種:大腸桿菌,產(chǎn)氣桿菌18~24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。

2.培養(yǎng)基:葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。

3.試劑:V-P試劑[40%氫氧化鉀水溶液(內(nèi)含0.3%肌酸)和6%α-奈酚酒精溶液]。

(三)實(shí)驗(yàn)方法

1. 分別接種大腸桿菌,產(chǎn)氣桿菌于兩支葡萄糖蛋白胨水中。

2. 置37℃培養(yǎng)48小時后,取出分別加入KOH1ml和α-奈酚溶液1ml ,搖勻,靜置試管架上5~15分鐘。

(四)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

培養(yǎng)液變?yōu)榧t色為陽性,不變色為陰性。

三、甲基紅試驗(yàn)

(一)、實(shí)驗(yàn)原理

某 些細(xì)菌如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,繼而分解為甲酸、乙酸、乳酸等,使培養(yǎng)基PH值降至4.5以下,加入甲基紅指示劑呈紅色,此為陽性反應(yīng);若產(chǎn)酸 量少或產(chǎn)生的酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為醇、醛、氣體和水等,則培養(yǎng)基的酸堿度仍在PH 6.2以上,加入甲基紅指示劑呈現(xiàn)黃色,為陰性反應(yīng)。

(二)、實(shí)驗(yàn)材料

1. 菌種:大腸桿菌,產(chǎn)氣桿菌18~24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。

2. 培養(yǎng)基:葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。

3. 試劑:甲基紅試劑。

(三)實(shí)驗(yàn)方法

1. 分別將大腸桿菌,產(chǎn)氣桿菌接種于兩支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中。

2. 置37℃培養(yǎng)2~3天取出,分別滴加甲基紅試劑2~3滴,混勻,觀察結(jié)果。

(四)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

大腸桿菌:+,產(chǎn)氣桿菌:-。

四、枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)

(一)、實(shí)驗(yàn)原理

枸 櫞酸鹽培養(yǎng)基系一綜合性培養(yǎng)基,其中枸櫞酸鈉為唯一碳源,磷酸二氫銨為唯一氮源。一般細(xì)菌能利用磷酸二氫銨作為氮源,但不一定能分解枸櫞酸鹽取得碳源。因 此,根據(jù)可否利用枸櫞酸鹽來鑒別細(xì)菌,如產(chǎn)氣桿菌可利用枸櫞鹽作為碳源,細(xì)菌生長繁殖,形成菌苔,分解枸櫞酸鹽生成堿性碳酸鹽,使培養(yǎng)基PH上升到7.0 以上,由綠色變?yōu)樯钐m色,為枸櫞酸鹽利用試驗(yàn)陽性;而大腸桿菌則不能分解枸櫞酸鹽,得不到碳源,不能生長,無菌苔形成,培養(yǎng)基顏色不發(fā)生變化,為枸櫞酸鹽 利用試驗(yàn)陰性。

(二)、實(shí)驗(yàn)材料

1. 菌種:大腸桿菌,產(chǎn)氣桿菌18~24小時瓊脂斜面培養(yǎng)物。

2. 培養(yǎng)基:枸櫞酸鹽斜面。

(三)實(shí)驗(yàn)方法

1. 分別將大腸桿菌,產(chǎn)氣桿菌接種于兩支枸櫞酸鹽斜面培養(yǎng)基。

2. 置37℃恒溫培養(yǎng)24小時后觀察結(jié)果。

(四)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

產(chǎn)氣桿菌:+(有菌苔生長,培養(yǎng)基變色)

大腸桿菌:-(無菌苔生長,培養(yǎng)基不變色)
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