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解決方案

MTT法及臺盼蘭拒染法活細(xì)胞增值檢測服務(wù)

點(diǎn)擊次數(shù):2978  日期:2013/11/29 13:25:21

一、技術(shù)服務(wù)簡介
噻唑藍(lán)(MTT)和臺盼藍(lán)拒染法是判別細(xì)胞活性*常用的兩種方法,MTT法又稱MTT比色法,是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。其檢測原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細(xì)胞中,而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點(diǎn)是靈敏度高、經(jīng)濟(jì)。
二、服務(wù)范圍
應(yīng)用MTT法檢測細(xì)胞活性或體外藥物對細(xì)胞增殖活性的影響。
三、收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)
詢價(jià)
四、服務(wù)周期
實(shí)驗(yàn)費(fèi)用以樣本數(shù)和細(xì)胞株的種類數(shù)目計(jì)算。實(shí)驗(yàn)周期為2~3個(gè)星期左右。
五、客戶須知
1. 寄送:委托單位的試驗(yàn)材料和試劑等均須采用特快專遞形式郵寄,有低溫要求的、固定要求的,按低溫保存、固定防碎方法運(yùn)輸,以確保實(shí)驗(yàn)物品的安全可靠。
2. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,本公司將結(jié)果及時(shí)發(fā)給客戶:實(shí)驗(yàn)報(bào)告書,包括IC50、實(shí)驗(yàn)試劑與設(shè)備、實(shí)驗(yàn)過程、結(jié)果說明、原始數(shù)據(jù)、細(xì)胞圖片等
3. 客戶應(yīng)對所提供的材料及信息負(fù)責(zé),如因客戶提供的材料及信息不準(zhǔn)確而引起的實(shí)驗(yàn)延誤或經(jīng)濟(jì)損失由客戶承擔(dān)。
六、實(shí)驗(yàn)服務(wù)咨詢及技術(shù)支持
公司:南京森貝伽生物科技有限公司
電話:025-66915470
手機(jī):18602534620
傳真:025-52797049
E-mail:senbeijia@163.com
七、技術(shù)步驟
1. 接種細(xì)胞:收集對數(shù)期細(xì)胞,調(diào)整細(xì)胞懸液濃度,每孔加入100ul,鋪板使待測細(xì)胞調(diào)密度至1000~10000孔,邊緣孔用無菌PBS填充。
2. 細(xì)胞培養(yǎng):5% CO2,37℃孵育,至細(xì)胞單層鋪滿孔底(96孔平底板)。
3. 藥物處理:加入濃度梯度的藥物,原則上,細(xì)胞貼壁后即可加藥,或兩小時(shí),或半天時(shí)間,但我們常在前一天下午鋪板,次日上午加藥.一般5~7個(gè)梯度,每孔100ul,設(shè)3~5個(gè)復(fù)孔。
4. 呈色:5% CO2,37℃孵育16~48小時(shí),倒置顯微鏡下觀察。每孔加入20ul MTT溶液(5mg/ml,即0.5% MTT),繼續(xù)培養(yǎng)4h。若藥物與MTT能夠反應(yīng),可先離心后棄去培養(yǎng)液,小心用PBS沖2~3遍后,再加入含MTT的培養(yǎng)液。
5. 溶解:終止培養(yǎng),小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。對于懸浮細(xì)胞需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加入150ul二甲基亞砜,置搖床上低速振蕩10min,使結(jié)晶物充分溶解。
6. 比色:在酶聯(lián)免疫檢測儀OD490nm處測量各孔的吸光值,記錄結(jié)果,以時(shí)間為橫坐標(biāo),吸光值為縱坐標(biāo),繪制細(xì)胞生長曲線。同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜),對照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)。 
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