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解決方案

ELISA常見組織樣本制備方法及處理指南

點擊次數(shù):8879  日期:2018/7/5 12:53:01

      為了保證ELISA實驗數(shù)據(jù)的可靠性,在收集標本前都必須有一個完整的計劃。我們提倡新鮮樣品應盡早檢測,對收集后一周內(nèi)檢測的樣本,及時儲存在4℃?zhèn)溆谩H缬刑厥庠蛐枰芷谛允占瘶颖,在取材后講標本及時分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰箱與室溫有一定溫差,蛋白容易降解,直接影響實驗質(zhì)量,故應避免反復凍融。不同的樣本請根據(jù)實際情況處理。
elisa樣本處理指南
      樣品制備方法
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應再次離心。
2. 血漿:應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成分時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成分時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
5.組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
elisa樣本收集
      注:
  1. 樣本需清澈透明,如有沉淀物,請離心除去后再測
  2. 請勿使用溶血、高血脂或污染的樣本
  3. 凍結血清融解后可上下顛倒充分混勻宣輕緩, 不要強烈震蕩
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