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解決方案

直接凝集反應(yīng)-免疫學(xué)技術(shù)

點(diǎn)擊次數(shù):2751  日期:2015/1/5 10:33:18

直接凝集反應(yīng)-免疫學(xué)技術(shù)
      某些病原微生物或紅細(xì)胞懸液等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合,在有適量電解質(zhì)存在下,經(jīng)過一定時(shí)間出現(xiàn)肉眼可見的凝集小塊,稱為凝集反應(yīng)(agglutination)。
      根據(jù)反應(yīng)的方式不同,凝集反應(yīng)可分為直接凝集反應(yīng)、間接凝集反應(yīng)和抗球蛋白試驗(yàn)等。直接凝集反應(yīng)時(shí)顆粒性抗原和相應(yīng)抗體直接結(jié)合,在有電解質(zhì)存在的條件下,出現(xiàn)肉眼可見的凝集小塊,為直接凝集反應(yīng)。有玻片凝集法和試管凝集法。前者是一種定性實(shí)驗(yàn),多用已知診斷血清檢驗(yàn)未知抗原和進(jìn)行細(xì)菌分型,也可以用來鑒定人類紅細(xì)胞ABO血型;后者是一種半定量試驗(yàn),用于鑒定被檢者血清中有無某些病原菌的抗體及其含量,以協(xié)助臨床診斷或供流行病學(xué)調(diào)查研究。本節(jié)將通過玻片凝集法和試管凝集法詳細(xì)介紹直接凝集反應(yīng)。
(一)玻片凝集試驗(yàn)
(1)取潔凈載玻片1片,一端滴生理鹽水1滴作為對照,另一端滴加診斷血清1滴。
(2)用接種環(huán)取分離好的病原菌,于生理鹽水中和診斷血清中分別混勻(注意不可先涂血清后涂鹽水以免發(fā)生誤差)。
(3)室溫靜置數(shù)分鐘。如果抗原抗體相對應(yīng)出現(xiàn)陽性反應(yīng),則診斷血清中出凝集塊,而鹽水側(cè)則為均勻的乳白色。否則為陰性反應(yīng)。
(二)試管凝集反應(yīng)
(1)排列潔凈干燥試管8支于試管架上。
(2)用吸管吸取生理鹽水,分別加0.5ml于各試管中。吸取10倍稀釋的被檢血清,加0.5ml于第一管中。
(3)自第一管開始稀釋,使充分混合,然后吸出0.5ml放入第二管,依次稀釋至第七管,在從第七管內(nèi)吸出0.5ml棄去。第一管至第七管血清稀釋度為1∶20,1∶40,1∶80,1∶160, 1∶320,1∶640;1∶1280。第八管不加血清,作為對照。
(4)吸取診斷菌液,每管加0.5ml(加菌液時(shí)由對照管向前依次加入),此時(shí)每管內(nèi)的血清稀釋度又增加一倍。其操作程序見表15-1。
(5)搖勻后,放37℃溫箱18~24h或37℃水浴箱4h后觀察結(jié)果。觀察結(jié)果時(shí)先觀察對照管,再觀察各試驗(yàn)管。注意觀察凝集顆粒的松軟、大小、均勻度等性狀以及液體的混濁程度。若液體仍呈均勻混濁或經(jīng)振搖后呈混濁者為陰性結(jié)果;上部液體較清亮,同時(shí)管底有凝集塊者為陽性反應(yīng)。陽性反應(yīng)者可根據(jù)下面標(biāo)準(zhǔn)確定凝集的強(qiáng)弱。
++++ : 完全凝集、上清液澄清。
+++ :大部凝集、上清液微混。
++ :中等凝集、上層液較混濁。
+ :少量凝集、上層液混濁。
- :無凝集、菌液混濁。
記錄結(jié)果后判定效價(jià)(又稱滴度)。凝集效價(jià)是指能發(fā)生中等凝集(++)現(xiàn)象的*高血清稀釋度。
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